血液细胞化学染色是在细胞形态学基础上，通过特定化学反应显示细胞内酶类、糖原、脂质、铁颗粒和其他功能成分的检测方法。其价值不在于替代流式免疫分型、细胞遗传学或分子检测，而是在骨髓涂片、外周血涂片和血液系统疾病初步鉴别中提供细胞系列归属、分化阶段和功能状态线索。

关键词：血液细胞化学染色；骨髓涂片；外周血涂片；过氧化物酶染色；苏丹黑B染色；非特异性酯酶染色；特异性酯酶染色；PAS染色；中性粒细胞碱性磷酸酶；铁染色；白血病鉴别

1血液细胞化学染色的基本定位

1.1检测对象

（1）细胞内酶活性

        血液细胞化学染色可显示髓系细胞、单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞和红系细胞中某些酶类活性，如髓过氧化物酶、特异性酯酶、非特异性酯酶、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶等。这些酶活性与细胞系列和分化阶段有关。

（2）细胞内化学成分

        部分染色用于显示糖原、脂质、铁颗粒和网状纤维相关成分。例如PAS染色用于观察糖原和糖蛋白，铁染色用于评价骨髓铁储存和环形铁粒幼细胞。

（3）细胞功能状态

        某些细胞化学反应反映细胞功能或成熟状态，如中性粒细胞碱性磷酸酶积分可用于辅助区分慢性粒细胞白血病与类白血病反应，非特异性酯酶可提示单核细胞分化特征。

1.2方法学特点

（1）依赖细胞形态背景

        细胞化学染色必须结合涂片形态学判断。阳性颗粒位于哪类细胞、阳性强度如何、阳性细胞比例多少，均需要在显微镜下结合细胞大小、核形、胞质量、颗粒和成熟阶段综合分析。

（2）结果多为半定量

        多数血液细胞化学染色结果以阴性、弱阳性、阳性、强阳性或积分形式表示。其本质多为半定量或分类判读，不宜简单等同于精确酶活定量。

（3）受样本质量影响明显

        骨髓涂片厚薄、细胞完整性、抗凝剂、固定条件、染液新鲜度、孵育温度和反应时间均会影响染色结果。细胞化学染色对前处理一致性要求较高。

表1 血液细胞化学染色的主要类型

2过氧化物酶染色

2.1染色原理

        过氧化物酶染色主要用于显示髓过氧化物酶活性。髓过氧化物酶存在于粒系细胞嗜天青颗粒和部分髓系原始细胞中，可催化过氧化氢氧化显色底物，形成棕黄色、棕黑色或深色颗粒沉积。

        该反应的核心意义是判断原始细胞是否具有髓系分化特征。一般而言，粒系细胞MPO阳性，单核系可弱阳性或阴性，淋巴系原始细胞通常阴性。

2.2应用场景

（1）急性白血病初步分型

        在急性白血病形态学诊断中，MPO阳性支持急性髓系白血病方向；MPO阴性则需考虑急性淋巴细胞白血病、未分化急性白血病或部分低分化AML。结果仍需结合流式免疫分型和遗传学检测。

（2）髓系分化判断

        部分原始细胞形态不典型时，MPO染色有助于确认是否存在髓系颗粒酶活性。阳性颗粒分布在胞质中，常与细胞分化程度相关。

（3）治疗后骨髓评价辅助

        在治疗后骨髓中，MPO染色可辅助识别再生粒系细胞和残留异常细胞，但不适合作为微小残留病变检测的独立方法。

2.3判读要点

        MPO判读应关注阳性细胞比例、阳性颗粒强度和阳性细胞形态。成熟中性粒细胞通常阳性明显；原始细胞弱阳性时需谨慎，避免将非特异性沉积或背景颗粒误判为阳性。

表2 过氧化物酶染色结果判读

3苏丹黑B染色

3.1染色原理

        苏丹黑B是一种脂溶性染料，可染色细胞内脂质、磷脂和髓系颗粒相关成分。血液细胞化学中，苏丹黑B常用于显示粒系细胞胞质颗粒，结果多表现为黑色或蓝黑色颗粒。

        SBB与MPO的临床用途相近，均可用于髓系分化判断。SBB阳性通常支持粒系或部分单核系分化，淋巴系细胞多为阴性。

3.2应用场景

（1）急性髓系白血病辅助鉴别

        SBB阳性可支持髓系来源，尤其在MPO结果较弱或需要补充判断时具有辅助价值。

（2）粒系成熟阶段观察

        随着粒系细胞成熟，SBB阳性颗粒通常更明显。成熟粒细胞阳性强，原始阶段阳性程度可能较弱。

（3）与MPO互补

        SBB检测的是脂质和颗粒相关成分，并非直接检测MPO酶活，因此与MPO结果不完全等同。某些情况下二者可相互印证，也可能出现强度差异。

3.3判读边界

        SBB可出现背景深染，且脂质或非特异性疏水结构可能造成干扰。判读时应结合细胞形态、阳性颗粒位置和对照细胞反应，不应只凭涂片整体颜色判断结果。

表3 MPO与SBB染色比较

4酯酶染色

4.1特异性酯酶染色

（1）染色原理

        特异性酯酶染色常以氯乙酸萘酚酯酶为代表，主要显示粒系细胞内酯酶活性。阳性反应多表现为红色、紫红色或棕红色颗粒沉积，定位于胞质。

（2）应用价值

        特异性酯酶阳性支持粒系分化，可用于急性髓系白血病中粒系成分识别。其与MPO、SBB共同构成粒系分化判断的重要细胞化学组合。

（3）判读注意

        成熟粒细胞常阳性较强，原始粒细胞可弱阳性。若涂片固定过度或反应条件不合适，酶活可能降低，导致假阴性。

4.2非特异性酯酶染色

（1）染色原理

        非特异性酯酶染色常使用α-萘乙酸酯或α-萘丁酸酯作为底物，主要显示单核细胞和巨噬细胞相关酯酶活性。阳性反应多呈弥散性或颗粒性胞质染色。

（2）单核系识别

        单核细胞、幼稚单核细胞和部分单核样白血病细胞常呈NSE阳性。该染色在急性单核细胞白血病、急性粒单核细胞白血病等鉴别中具有价值。

（3）氟化钠抑制试验

        单核系非特异性酯酶活性通常可被氟化钠抑制。若NSE阳性反应被NaF明显抑制，支持单核细胞分化；若不被抑制，则需考虑其他细胞来源或非特异反应。

4.3联合判读

        急性白血病中，特异性酯酶与非特异性酯酶联合使用可帮助区分粒系、单核系和粒单混合分化。粒系细胞多表现为特异性酯酶阳性；单核系细胞多表现为NSE阳性且NaF抑制；粒单核细胞白血病可同时出现两类阳性群体。

表4 酯酶染色的应用区别

5PAS染色

5.1染色原理

        PAS染色即过碘酸-Schiff染色。过碘酸可氧化糖类邻二醇结构，产生醛基，随后与Schiff试剂反应形成紫红色或品红色染色。血液细胞中PAS主要显示糖原、糖蛋白和部分多糖相关成分。

5.2应用场景

（1）急性淋巴细胞白血病

        淋巴母细胞可呈PAS阳性，常见粗颗粒状或块状阳性。该特征可作为ALL形态学辅助指标，但不能替代免疫分型。

（2）红白血病和红系异常增生

        异常红系细胞可出现PAS阳性，尤其是幼红细胞异常增生时具有参考价值。正常幼红细胞通常PAS阴性或弱反应，异常阳性提示红系病态造血线索。

（3）巨核细胞和血小板相关观察

        巨核细胞和血小板可呈PAS阳性，有助于观察血小板系统和部分巨核细胞异常。

5.3判读要点

        PAS阳性模式比单纯阳性强度更有意义。弥散性、细颗粒、粗颗粒或块状阳性提示不同细胞内糖类分布状态。判读时应结合细胞系列、形态异常和其他细胞化学结果。

表5 PAS染色常见结果模式

6中性粒细胞碱性磷酸酶染色

6.1染色原理

        中性粒细胞碱性磷酸酶染色用于显示成熟中性粒细胞内碱性磷酸酶活性。反应产物多定位于成熟中性粒细胞胞质，结果通常通过阳性强度和阳性细胞比例计算积分。

6.2临床应用

（1）CML与类白血病反应鉴别

        慢性粒细胞白血病中NAP积分通常降低；类白血病反应中NAP积分常升高。该指标曾是二者鉴别的重要实验室依据之一。

（2）感染和炎症状态评估

        严重感染、炎症刺激和应激状态可使中性粒细胞碱性磷酸酶活性升高，提示中性粒细胞功能激活。

（3）骨髓增殖性疾病辅助判断

        NAP积分可为部分骨髓增殖性疾病鉴别提供参考，但现代诊断更依赖遗传学、分子标志物和临床综合判断。

6.3判读限制

        NAP积分受感染、药物、妊娠、激素、样本保存和操作条件影响。其结果不能单独用于诊断CML或其他骨髓增殖性疾病，应结合BCR-ABL1检测、血象、骨髓形态和临床表现。

表6 NAP染色结果的常见解释

7铁染色

7.1染色原理

        骨髓铁染色常用普鲁士蓝反应显示三价铁。铁与酸性亚铁氰化物反应形成蓝色沉淀，用于观察骨髓细胞外储存铁和幼红细胞内铁颗粒。

7.2应用场景

（1）骨髓储存铁评价

        骨髓巨噬细胞中的蓝色颗粒可反映储存铁情况。缺铁性贫血常表现为骨髓储存铁减少或缺如。

（2）铁粒幼细胞观察

        幼红细胞胞质中可见铁颗粒者称铁粒幼细胞。若铁颗粒围绕细胞核排列形成环状，则称环形铁粒幼细胞，是某些骨髓增生异常综合征和铁粒幼细胞性贫血的重要形态学线索。

（3）贫血鉴别

        铁染色有助于区分缺铁性贫血、慢性病贫血、铁粒幼细胞性贫血和部分MDS相关贫血。

7.3判读要点

        铁染色需要分别评价细胞外铁和细胞内铁。细胞外铁反映储存铁，细胞内铁反映红系利用铁情况。涂片铁污染、脱色不当或样本颗粒过少均会影响判读。

表7 骨髓铁染色的判读方向

8酸性磷酸酶及其他特殊染色

8.1酸性磷酸酶染色

        酸性磷酸酶染色可显示部分淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞和某些异常细胞中的酸性磷酸酶活性。其在毛细胞白血病等疾病中具有一定辅助价值，尤其是耐酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）反应曾用于毛细胞白血病辅助诊断。

8.2β-葡萄糖醛酸酶染色

        β-葡萄糖醛酸酶染色可反映部分单核-巨噬细胞系统相关酶活性，在单核细胞分化判断中可作为补充指标，但临床常规应用频率低于MPO、SBB、酯酶和PAS。

8.3碱性磷酸酶以外的酶染色

        部分实验室还可开展酸性酯酶、磷酸酶、脱氢酶等染色，用于特定研究或疾病辅助判断。此类方法的应用需明确检测目的、阳性对照和判读标准。

9血液细胞化学染色的组合应用

9.1急性白血病初步鉴别

        急性白血病中，MPO、SBB、特异性酯酶、非特异性酯酶和PAS常用于初步区分髓系、单核系和淋巴系分化。MPO或SBB阳性支持髓系分化；NSE阳性且NaF抑制支持单核系分化；PAS粗颗粒或块状阳性可支持淋巴母细胞或异常红系线索。

9.2髓系白血病亚型判断

        在急性粒细胞白血病中，MPO、SBB和特异性酯酶常呈阳性；在急性单核细胞白血病中，非特异性酯酶阳性更有意义；在急性粒单核细胞白血病中，可见粒系和单核系细胞化学特征并存。

9.3贫血和红系异常评价

        铁染色和PAS染色可用于贫血分类和红系异常增生评估。铁染色关注储存铁、铁粒幼细胞和环形铁粒幼细胞；PAS染色可提示红系病态造血和某些红白血病相关改变。

9.4骨髓增殖性疾病辅助判断

        NAP染色可作为中性粒细胞功能状态和反应性粒细胞增多判断的辅助方法。慢性粒细胞白血病常见NAP积分降低，但现代诊断必须结合BCR-ABL1等分子检测。

表8 常见疾病场景下的细胞化学染色组合

10质量控制与常见问题

10.1涂片质量

        血液细胞化学染色要求涂片厚薄适中、细胞分布均匀、细胞形态完整。过厚涂片会导致染色不均和背景高；过薄涂片阳性细胞数量不足，不利于积分和分类判读。

10.2固定条件

        不同细胞化学染色对固定剂敏感性不同。酶类染色尤其需要避免固定过度导致酶活降低。固定时间、固定液种类和样本干燥状态应根据具体染色方法严格控制。

10.3对照设置

        每次染色应设置阳性对照和阴性对照。成熟中性粒细胞可作为MPO和SBB的内对照；已知阳性样本可用于酯酶、PAS、NAP和铁染色质控。

10.4结果解释

        细胞化学染色结果应与细胞形态、血象、骨髓象、流式免疫分型、染色体核型和分子检测结果共同解释。单一染色阳性或阴性不能独立完成血液系统肿瘤诊断。

表9 血液细胞化学染色常见问题与处理方向

11血液细胞化学染色相关试剂选型

表10 血液细胞化学染色常用基础试剂与材料

表11 血液细胞化学染色成套试剂与辅助材料选型

        血液细胞化学染色的核心价值在于将细胞形态与功能成分显示结合起来，为血液系统疾病初步鉴别提供方向性证据。实际应用中应优先保证涂片质量、固定条件、阳性对照和判读标准一致，并将结果纳入形态学、免疫表型、遗传学和分子检测的综合诊断框架中。