微丝染色的主要方法与实验选择
微丝染色的主要方法与实验选择
微丝主要由肌动蛋白聚合形成,是细胞骨架的重要组成部分,参与细胞形态维持、黏附迁移、胞质分裂、内吞运输、应力纤维形成和细胞极性建立。微丝染色的目的并不只是显示细胞轮廓,而是通过特异性标记 F-actin、总肌动蛋白或动态聚合结构,分析细胞骨架重排、细胞状态变化和外界刺激后的形态学响应。
关键词:微丝染色;F-actin;肌动蛋白;鬼笔环肽;免疫荧光;活细胞成像;细胞骨架;应力纤维;细胞迁移;超分辨成像
1、微丝染色的基本逻辑
1.1 微丝染色的检测对象
(1)F-actin
F-actin 是聚合态肌动蛋白,是微丝染色中最核心的观察对象。细胞内的应力纤维、皮质肌动蛋白、伪足、片状伪足、丝状伪足和胞质分裂环等结构,均依赖 F-actin 的空间组织。
(2)G-actin
G-actin 是单体肌动蛋白,通常不形成清晰纤维状结构。多数常规微丝染色方法优先标记 F-actin,而不是 G-actin。若实验目的是区分聚合态与单体态肌动蛋白,需要采用特定探针、生化分级或聚合/解聚对照辅助判断。
(3)总肌动蛋白
总肌动蛋白包括 F-actin 和 G-actin,也可包括不同亚型肌动蛋白。抗体法通常更适合显示特定肌动蛋白亚型或总 Actin 表达,但其纤维结构分辨效果通常不如鬼笔环肽类 F-actin 染色。
1.2 方法选择原则
(1)固定样本优先选择鬼笔环肽
对于固定细胞、组织切片或常规免疫荧光实验,荧光标记鬼笔环肽是显示 F-actin 的常用方法。其信号强、背景低、纤维结构清晰,适合观察细胞骨架形态和应力纤维。
(2)蛋白表达定位优先选择抗体法
若研究对象是 β-actin、α-SMA、γ-actin、Cortactin 或 α-Actinin 等微丝相关蛋白,应选择免疫荧光染色。抗体法适合表达定位和亚型分析,但不能简单等同于 F-actin 聚合状态分析。
(3)动态过程优先选择活细胞探针
若需要观察微丝形成、消失、重排或迁移前缘变化,应选择 LifeAct、Utrophin-ABD、F-tractin、SiR-actin 等活细胞标记策略。此类方法更适合动态成像,但需要重点控制探针对细胞骨架本身的干扰。
表1 微丝染色方法的基本分类
方法类型 | 代表方法 | 主要检测对象 | 适用样本 | 核心用途 |
鬼笔环肽染色 | FITC/Rhodamine/Alexa Fluor-Phalloidin | F-actin | 固定细胞、组织切片 | 显示微丝结构和应力纤维 |
抗体免疫荧光 | Anti-actin、Anti-β-actin、Anti-α-SMA | 总 Actin 或特定亚型 | 固定细胞、组织切片 | 表达定位和亚型分析 |
活细胞蛋白探针 | LifeAct、Utrophin-ABD、F-tractin | 活细胞 F-actin | 活细胞 | 动态重排、迁移和胞质分裂观察 |
小分子活细胞探针 | SiR-actin、SPY-actin 类探针 | 活细胞 F-actin | 活细胞 | 活细胞微丝成像、长时程观察 |
转基因融合蛋白 | GFP-actin、mCherry-actin | 标记肌动蛋白池 | 活细胞 | 动态表达和细胞骨架重构观察 |
超分辨成像染色 | 荧光鬼笔环肽、优化荧光抗体 | F-actin 精细结构 | 固定细胞为主 | 微丝束、皮质网络和伪足结构分析 |
2、鬼笔环肽染色法
2.1 方法原理
(1)F-actin 特异结合
鬼笔环肽可特异性结合 F-actin,而不主要结合 G-actin。荧光标记后的鬼笔环肽可直接显示聚合态微丝结构,因此常用于观察应力纤维、细胞边缘皮质 Actin 和迁移前缘结构。
(2)荧光标记类型
常见荧光标记包括 FITC、TRITC、Rhodamine、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 555、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594 和 Alexa Fluor 647 等。选择时应根据显微镜通道、抗体荧光组合和核染料通道进行搭配。
(3)固定样本优势
鬼笔环肽一般用于固定并通透处理后的样本。固定后细胞膜通透性提高,探针可进入细胞并结合 F-actin,形成清晰纤维状信号。
2.2 实验流程
(1)固定
常用 4% 多聚甲醛固定,可较好保留细胞形态和微丝结构。甲醇固定可能破坏部分 F-actin 结构,不是常规鬼笔环肽染色的首选。
(2)通透
Triton X-100 或皂苷可用于细胞膜通透。通透过强可能造成细胞边缘结构受损,通透不足则导致探针进入不充分。
(3)染色
荧光鬼笔环肽通常在避光条件下孵育。染色浓度和时间需按探针说明优化,过高浓度会增加背景,过低浓度则导致微丝信号不足。
(4)封片
荧光样本应使用抗荧光淬灭封片剂,并尽量避光保存。若需要核定位,可联合 DAPI、Hoechst 或 DRAQ5 进行核复染。
2.3 应用场景
(1)细胞形态分析
鬼笔环肽染色可清晰显示细胞铺展面积、细胞边缘、应力纤维数量和微丝方向性,适合细胞黏附、迁移、机械刺激和药物处理实验。
(2)细胞骨架重排
当细胞受到 RhoA/ROCK、Rac1、Cdc42、TGF-β、炎症因子或基质硬度变化影响时,F-actin 会发生明显重排。鬼笔环肽染色是观察这类变化的首选方法之一。
(3)细胞分裂与收缩结构
在胞质分裂、收缩环形成、细胞收缩和上皮屏障变化研究中,F-actin 定位可反映细胞力学状态和细胞骨架组织方式。
表2 鬼笔环肽染色的适用场景与判读重点
应用场景 | 主要观察结构 | 判读重点 | 注意事项 |
细胞铺展 | 细胞边缘、应力纤维 | 细胞面积、纤维密度和方向 | 需统一铺板密度和培养时间 |
细胞迁移 | 片状伪足、丝状伪足 | 前缘 F-actin 富集和极性 | 固定时间会影响动态结构保存 |
EMT/纤维化 | 应力纤维、α-SMA 相关结构 | 纤维束增强和细胞拉长 | 可联合 α-SMA 免疫荧光 |
细胞毒性 | 微丝断裂、塌陷、聚集 | 骨架完整性和细胞边缘变化 | 需排除死亡细胞假象 |
胞质分裂 | 收缩环 | 分裂沟 F-actin 富集 | 需捕获合适细胞周期阶段 |
屏障功能 | 皮质 Actin、连接周围微丝 | 细胞边界连续性 | 可联合 ZO-1、E-cadherin 等标记 |
3、抗体免疫荧光法
3.1 方法原理
(1)总 Actin 检测
抗 Actin 抗体可识别细胞内肌动蛋白,适合观察总 Actin 表达和定位。由于抗体可同时识别不同状态的 Actin,其结果不能完全等同于 F-actin 聚合结构。
(2)肌动蛋白亚型检测
α-SMA、β-actin、γ-actin 等亚型抗体可用于区分不同细胞类型或功能状态。例如 α-SMA 常用于肌成纤维细胞、血管平滑肌细胞和纤维化相关细胞标记。
(3)微丝调控蛋白共染
Cortactin、CAPG、α-Actinin 等蛋白可反映微丝分支、束化、迁移前缘和应力纤维相关结构。此类抗体常与 F-actin 探针联合,用于分析微丝重排机制。
3.2 实验流程
(1)固定与通透
抗体染色通常需要固定、通透和封闭。固定条件会影响抗原表位保存,多聚甲醛固定适合多数细胞骨架相关抗体,甲醇固定适用于部分抗体但可能影响 F-actin 结构。
(2)封闭
封闭液可降低非特异性结合。常用 BSA、正常血清或商业封闭液。若背景较高,应优化封闭体系、抗体稀释倍数和洗涤条件。
(3)一抗与二抗孵育
一抗决定特异性,二抗决定荧光信号强度和通道选择。多重染色时应避免宿主来源冲突和通道串色。荧光直标抗体可减少二抗步骤,适合多色共染或流程简化。
3.3 方法特点
(1)优势
抗体法可检测特定肌动蛋白亚型,适合研究细胞分化、肌成纤维化、平滑肌表型、肿瘤间质激活和组织重塑。
(2)局限
抗体法对 F-actin 纤维结构的显示通常不如鬼笔环肽清晰。若实验问题是微丝束排列和聚合状态,鬼笔环肽仍更直接。
(3)互补应用
鬼笔环肽显示 F-actin 结构,抗体法显示 Actin 亚型或相关调控蛋白。二者联合可区分“结构重排”和“表达变化”。
表3 鬼笔环肽染色与抗体免疫荧光的比较
比较项目 | 鬼笔环肽染色 | 抗体免疫荧光 |
主要检测对象 | F-actin | 总 Actin 或特定 Actin 亚型 |
结构显示能力 | 强,纤维结构清晰 | 与抗体和固定条件相关 |
是否适合亚型分析 | 不适合 | 适合 |
操作复杂度 | 较低 | 较高 |
活细胞适用性 | 常规不适用 | 常规不适用 |
与其他标记共染 | 容易 | 需考虑抗体宿主和通道 |
典型用途 | 微丝结构、应力纤维、细胞边缘 | α-SMA、β-actin、细胞类型和表达定位 |
4、活细胞微丝染色与动态成像
4.1 遗传编码探针
(1)LifeAct
LifeAct 是一类常用的 F-actin 结合短肽,可与荧光蛋白融合,用于活细胞微丝动态观察。其优点是信号相对均匀、对细胞形态干扰较小,但高表达仍可能影响 Actin 动态。
(2)Utrophin-ABD
Utrophin 的 Actin 结合结构域可用于标记 F-actin,常用于活细胞或发育生物学成像。与 LifeAct 相比,其结合特性和结构显示效果不同,应根据细胞类型优化。
(3)F-tractin
F-tractin 可用于标记 F-actin 结构,适合动态观察细胞迁移、伪足形成和细胞骨架重排。过表达风险仍需通过低表达载体或稳定表达筛选控制。
4.2 荧光蛋白标记 Actin
(1)GFP-actin
GFP-actin 可直接报告肌动蛋白在细胞内的分布和动态变化。该方法适合长期活细胞成像和细胞骨架重构研究。
(2)表达干扰
外源 Actin 融合蛋白可能改变内源 Actin 聚合、解聚和与结合蛋白的相互作用。表达水平过高时,细胞形态和微丝动态可能偏离真实状态。
(3)对照设置
使用 GFP-actin 时应设置未转染对照、空载体对照和低表达筛选条件。若条件允许,可与固定后的鬼笔环肽染色结果进行交叉验证。
4.3 小分子活细胞探针
(1)SiR-actin
SiR-actin 属于可用于活细胞微丝成像的小分子探针,常用于远红通道。其优势是无需转染,适合部分难转染细胞和短期动态成像。
(2)SPY-actin 类探针
SPY555-actin、SPY650-actin 等可用于活细胞或固定样本中 F-actin 成像。不同通道的探针可根据多色成像方案选择,适合与核染、线粒体标记或目标蛋白荧光标记联合。
(3)应用边界
活细胞探针适合观察动态过程,但不宜在未验证条件下用于精确定量 F-actin 总量。对药物筛选或长期成像,应评估探针对细胞迁移、增殖和形态的影响。
表4 活细胞微丝标记方法比较
方法 | 标记对象 | 优势 | 主要局限 |
LifeAct 荧光蛋白 | F-actin 动态结构 | 表达构建成熟,适合动态观察 | 高表达可能干扰微丝动态 |
Utrophin-ABD 荧光蛋白 | F-actin | 结构显示较稳定 | 需转染或构建稳定细胞系 |
F-tractin 荧光蛋白 | F-actin | 适合迁移和形态动态观察 | 表达水平需严格控制 |
GFP-actin | 标记肌动蛋白池 | 可观察 Actin 整体动态 | 外源 Actin 可能影响内源系统 |
SiR-actin | 活细胞 F-actin | 无需转染,远红通道成像 | 浓度过高可能影响微丝动力学 |
SPY-actin 类探针 | 活细胞或固定样本 F-actin | 通道选择灵活,适合多色成像 | 需优化浓度和孵育时间 |
5、组织样本中的微丝染色
5.1 冰冻切片
(1)适用性
冰冻切片较适合保留部分细胞骨架结构和抗原活性,可用于鬼笔环肽染色或 Actin 相关免疫荧光。适用于肌组织、上皮组织、血管组织和肿瘤组织中微丝或肌动蛋白相关结构观察。
(2)固定条件
冰冻切片可使用多聚甲醛固定,也可根据抗体要求选择丙酮或甲醇固定。若目标是 F-actin 结构,通常应避免过强有机溶剂处理导致微丝结构破坏。
(3)背景控制
组织样本自发荧光、非特异结合和厚度差异较明显。需要设置阴性对照、无一抗对照和合适的通道组合。
5.2 石蜡切片
(1)免疫组化与免疫荧光
石蜡切片更常用于 Actin 亚型抗体检测,例如 α-SMA 显示平滑肌、血管壁或肌成纤维细胞。由于石蜡处理可能影响 F-actin 结构,鬼笔环肽在石蜡切片中的效果通常不如细胞爬片稳定。
(2)抗原修复
Actin 相关抗体在石蜡切片上可能需要热修复或酶修复。修复条件过强会增加组织背景,过弱则信号不足。
(3)组织结构判读
组织中的 Actin 阳性不一定代表微丝结构重排,也可能反映平滑肌、肌成纤维细胞或血管成分。判读时应结合组织位置和细胞形态。
表5 组织样本中微丝相关染色的选择
样本类型 | 推荐方法 | 主要观察内容 | 判读要点 |
细胞爬片 | 鬼笔环肽染色 | F-actin、应力纤维、细胞边缘 | 最适合微丝结构观察 |
细胞球/类器官 | 鬼笔环肽、抗 Actin 免疫荧光 | 皮质 Actin、细胞极性 | 需注意探针渗透深度 |
冰冻切片 | 鬼笔环肽、α-SMA 免疫荧光 | 微丝分布和肌动蛋白相关结构 | 控制自发荧光和切片厚度 |
石蜡切片 | α-SMA、β-actin 等抗体 | 平滑肌、肌成纤维细胞、组织结构 | 更适合表达定位,不适合精细 F-actin 网络 |
肌组织 | Actin 相关抗体、鬼笔环肽 | 肌纤维结构和细胞骨架 | 需区分肌节结构与普通微丝网络 |
血管组织 | α-SMA、F-actin 相关染色 | 平滑肌层和血管壁结构 | 需结合弹力纤维或内皮标记判断 |
6、超分辨与高内涵微丝成像
6.1 超分辨成像
(1)适用方法
STED、SIM、STORM/PALM 等超分辨成像可用于观察微丝束、皮质 Actin 网络、丝状伪足和细胞连接区域的精细结构。荧光鬼笔环肽和高光稳定性探针常用于固定样本超分辨成像。
(2)染料选择
超分辨成像对染料亮度、光稳定性和标记密度要求较高。远红或高光稳定性染料通常更适合长时间曝光和高功率激发。
(3)样本制备
固定质量、背景荧光、封片介质和折射率匹配会显著影响成像分辨率。微丝结构细且密集,制样不当容易造成假性断裂或纤维融合。
6.2 高内涵分析
(1)定量指标
高内涵成像可定量细胞面积、F-actin 强度、应力纤维方向性、细胞圆度、边缘粗糙度、核-胞质比例和细胞群体异质性。
(2)图像分割
微丝染色常用于识别细胞边界,但在高密度细胞或强应力纤维背景中,单独依赖 F-actin 分割可能不稳定。可联合核染和膜标记提高分割质量。
(3)批次控制
高内涵实验需要统一固定时间、染色浓度、曝光参数、图像阈值和孔位布局。不同批次间直接比较时,应设置阳性和阴性处理对照。
表6 微丝染色的常用定量指标
定量指标 | 主要含义 | 适用方法 | 注意事项 |
F-actin 总荧光强度 | 微丝信号总体水平 | 鬼笔环肽、高内涵成像 | 受曝光和细胞面积影响 |
应力纤维密度 | 纤维束丰富程度 | 鬼笔环肽、超分辨成像 | 需统一阈值和算法 |
纤维方向性 | 微丝排列一致性 | 图像分析、方向性分析工具 | 对细胞形态和拍摄角度敏感 |
细胞铺展面积 | 细胞黏附和形态变化 | 鬼笔环肽联合核染 | 高密度细胞不易分割 |
细胞边缘 F-actin 富集 | 迁移前缘或皮质 Actin 变化 | 鬼笔环肽、LifeAct | 需定义边缘区域 |
丝状伪足数量 | 细胞迁移和探索能力 | 高分辨或超分辨成像 | 细小结构易受分辨率限制 |
核周微丝分布 | 细胞张力和核形态相关变化 | 鬼笔环肽联合核染 | 需区分焦平面差异 |
7、微丝染色相关产品选型
表7 微丝染色相关试剂与材料选型
货号 | 名称 | 级别/纯度/规格 | 产品类别 | 关联染色方法 | 方法学应用定位 |
Actin-Tracker Red-555 (微丝红色荧光探针) |
| F-actin荧光探针 | 微丝荧光染色 | 直接用于 F-actin/微丝结构显示,适合观察应力纤维、皮质 Actin 和细胞边缘骨架 | |
Actin-Tracker Red-594 (微丝红色荧光探针) |
| F-actin荧光探针 | 微丝荧光染色 | 直接用于 F-actin 红色通道成像,适合与绿色抗体信号或蓝色核染联合 | |
Actin-Tracker Red-Rhodamine (微丝红色荧光探针) |
| F-actin荧光探针 | 微丝荧光染色 | 可用于固定细胞中微丝、应力纤维和细胞骨架重排观察 | |
微丝染色液 (R250法) | BioReagent, 生物染色剂, 用于显微镜 | 常规微丝染色液 | R250法微丝染色 | 用于贴壁细胞中由微丝构成的应力纤维显示,适合常规光学显微镜下观察细胞铺展、应力纤维分布和细胞骨架形态变化 | |
Actin Beta Mouse mAb | 敲除验证 | β-actin抗体 | Actin免疫荧光/免疫染色 | 用于 β-actin 表达定位,不等同于 F-actin 聚合结构显示 | |
beta Actin Mouse mAb | 无载体,ExactAb™,无叠氮钠,已验证,高性能,PBS Only,见COA | β-actin抗体 | Actin免疫荧光/免疫染色 | 适合 β-actin 定位或共染分析,用于区分 Actin 表达与微丝结构变化 | |
Recombinant beta Actin Antibody | ExactAb™, 已验证, 重组, 高性能, 见COA | β-actin重组抗体 | Actin免疫荧光/免疫染色 | 可用于总 β-actin 表达定位和细胞骨架相关免疫染色 | |
Recombinant Actin Beta Antibody | 敲低验证 | β-actin重组抗体 | Actin免疫荧光/免疫染色 | 用于 β-actin 表达定位或方法学验证,适合作为抗体法微丝相关检测条目 | |
beta Actin Mouse mAb (AF405) | ExactAb™, 已验证, 0.5 mg/mL | 荧光标记β-actin抗体 | 直接免疫荧光染色 | AF405 通道标记 β-actin,适合避免二抗步骤的多色成像 | |
beta Actin Mouse mAb (AF488) | ExactAb™, 已验证, 0.5 mg/mL | 荧光标记β-actin抗体 | 直接免疫荧光染色 | AF488 通道标记 β-actin,适合与红色微丝探针或红色核/膜标记联合 | |
beta Actin Mouse mAb (AF555) | ExactAb™, 已验证, 0.5 mg/mL | 荧光标记β-actin抗体 | 直接免疫荧光染色 | AF555 通道用于 β-actin 定位,适合多色免疫荧光组合 | |
beta Actin Mouse mAb (AF647) | ExactAb™, 已验证, 0.5 mg/mL | 荧光标记β-actin抗体 | 直接免疫荧光染色 | 远红通道标记 β-actin,适合组织背景较高或多色成像场景 | |
beta Actin Mouse mAb (TRITC) | ExactAb™, 已验证, 无叠氮钠, Ex:557nm, Em:576nm, 0.5 mg/mL | 荧光标记β-actin抗体 | 直接免疫荧光染色 | TRITC 通道标记 β-actin,适合常规荧光显微镜观察 | |
beta Actin Mouse mAb (Biotin) | ExactAb™, 高性能, 已验证, 无叠氮钠, 1.0 mg/mL | 生物素标记β-actin抗体 | Actin免疫染色/放大检测 | 可用于 β-actin 免疫染色体系,适合需要链霉亲和素信号放大的检测方案 | |
alpha-Smooth Muscle Actin Mouse mAb | 无载体,ExactAb™,无叠氮钠,已验证,高性能,PBS Only,≥95%(SDS-PAGE),1.0 mg/mL | α-SMA抗体 | α-SMA免疫荧光/免疫染色 | 用于平滑肌细胞、肌成纤维细胞和纤维化相关微丝表型分析 | |
alpha-Smooth Muscle Actin Mouse mAb | 无载体, ExactAb™, 已验证, 高性能, 见COA | α-SMA抗体 | α-SMA免疫荧光/免疫染色 | 用于 α-SMA 表达定位,适合与 F-actin 探针联合区分肌成纤维化表型 | |
Recombinant Alpha Smooth Muscle Actin Antibody | 敲低验证 | α-SMA重组抗体 | α-SMA免疫荧光/免疫染色 | 可用于 α-SMA 定位和方法验证,适合微丝相关纤维化实验 | |
Recombinant Alpha Smooth Muscle Actin Antibody | 敲低验证 | α-SMA重组抗体 | α-SMA免疫荧光/免疫染色 | 用于 α-SMA 免疫染色,辅助判断平滑肌样或肌成纤维样细胞骨架表型 | |
alpha-Smooth Muscle Actin Mouse mAb (AF405) | ExactAb™, 已验证, 0.5 mg/mL | 荧光标记α-SMA抗体 | 直接免疫荧光染色 | AF405 通道直接标记 α-SMA,适合多色共染体系 | |
alpha-Smooth Muscle Actin Mouse mAb (AF488) | ExactAb™, 已验证, 0.5 mg/mL | 荧光标记α-SMA抗体 | 直接免疫荧光染色 | AF488 通道直接标记 α-SMA,可与红色 F-actin 探针搭配 | |
alpha-Smooth Muscle Actin Mouse mAb (Cy3) | ExactAb™, 已验证, 0.5 mg/mL | 荧光标记α-SMA抗体 | 直接免疫荧光染色 | Cy3 通道用于 α-SMA 定位,适合观察肌成纤维化和应力纤维相关表型 | |
alpha-Smooth Muscle Actin Mouse mAb (Cy5) | ExactAb™, 已验证, 0.5 mg/mL | 荧光标记α-SMA抗体 | 直接免疫荧光染色 | Cy5 远红通道用于 α-SMA 定位,适合多色组织或细胞成像 | |
alpha-Smooth Muscle Actin Mouse mAb (TRITC) | ExactAb™, 已验证, 0.5 mg/mL | 荧光标记α-SMA抗体 | 直接免疫荧光染色 | TRITC 通道直接标记 α-SMA,适合常规荧光显微镜观察 | |
Recombinant Alpha Skeletal Muscle Actin Antibody | 重组, ExactAb™, 已验证, 高性能, 见COA | 骨骼肌Actin抗体 | 肌动蛋白亚型免疫染色 | 适合肌组织或肌源性细胞中骨骼肌 Actin 亚型定位 | |
gamma Actin Antibody | ExactAb™, Validated, Carrier Free, 2.0 mg/mL | γ-actin抗体 | Actin亚型免疫染色 | 用于 γ-actin 定位和表达分析,适合作为 Actin 亚型染色条目 | |
Actin Regulatory Protein CAPG/MCP Mouse mAb | ExactAb™, Validated, Carrier Free, 1.0 mg/mL | 微丝调控蛋白抗体 | Actin调控蛋白免疫染色 | CAPG/MCP 为 Actin 调控相关蛋白,可用于分析微丝重排相关调控结构 | |
Actin Regulatory Protein CAPG/MCP Mouse mAb | PBS Only,见COA | 微丝调控蛋白抗体 | Actin调控蛋白免疫染色 | 用于 Actin 调控蛋白定位,适合作为微丝重排机制分析配套抗体 | |
Recombinant Cortactin Antibody | 敲低验证 | Cortactin抗体 | 微丝相关结构免疫染色 | Cortactin 参与 Actin 分支和迁移前缘结构,可用于伪足、迁移和皮质 Actin 相关研究 | |
Recombinant Cortactin Antibody | ExactAb™, Validated, 重组, 0.1 mg/mL | Cortactin抗体 | 微丝相关结构免疫染色 | 用于 Cortactin 定位,适合与 F-actin 探针联合分析细胞迁移和 Actin 重排 | |
Recombinant Actinin Alpha 4 Antibody | 敲除验证 | α-Actinin 4抗体 | 微丝相关结构免疫染色 | α-Actinin 参与 Actin 纤维束交联,可用于应力纤维和黏附相关结构分析 | |
Recombinant Sarcomeric Alpha Actinin Antibody | ExactAb™, Validated, 重组, 0.3 mg/mL | 肌节α-Actinin抗体 | 肌组织/肌节结构免疫染色 | 适合肌细胞或肌组织中肌节 Actin 相关结构定位 | |
DRAQ5 荧光探针 |
| 核复染配套探针 | 微丝染色联合核复染 | 不标记微丝,可用于细胞核定位、细胞计数和多色成像配套 | |
7-氨基放线菌素D(7-AAD) | Moligand™, ≥97%(HPLC) | 细胞状态辅助染料 | 微丝损伤/细胞毒性实验辅助染色 | 不显示微丝,可用于识别膜完整性受损细胞,避免将死亡细胞骨架塌陷误判为特异性微丝重排 | |
Fischor封片剂 | BioReagent,用于显微镜,适用于免疫荧光(IF),适用于免疫组织化学(for IHC) | 封片材料 | 微丝荧光染色封片 | 用于微丝免疫荧光或探针染色后的封片保存 | |
增强型荧光淬灭封片剂 | BioReagent, 适用于荧光分析, 适用于免疫荧光(IF) | 抗荧光淬灭封片剂 | 荧光微丝染色封片 | 用于降低 Actin-Tracker 或荧光抗体信号光漂白 | |
抗荧光淬灭封片剂 |
| 抗荧光淬灭封片剂 | 荧光微丝染色封片 | 用于 F-actin 荧光染色或 Actin 免疫荧光后的信号保存 | |
常规甘油封片剂 | BioReagent,用于显微镜,适用于免疫荧光(IF),适用于荧光分析 | 封片材料 | 微丝荧光染色封片 | 适合常规荧光显微观察中的微丝染色样本封片 | |
甘油PBS封片剂 | BioReagent,用于显微镜,适用于免疫荧光(IF),适用于荧光分析 | 封片材料 | 微丝荧光染色封片 | 适合 F-actin 荧光染色后保持样本湿润和观察稳定性 | |
聚乙烯醇抗荧光淬灭封片剂 | 适用于免疫荧光(IF),BioReagent,用于显微镜,适用于荧光分析 | 抗荧光淬灭封片剂 | 荧光微丝染色封片 | 适合长期保存荧光微丝染色切片或细胞爬片 | |
聚乙烯醇甘油封片剂 | BioReagent,用于显微镜,适用于免疫荧光(IF),适用于免疫组织化学(for IHC) | 封片材料 | 微丝荧光染色封片 | 可用于微丝免疫荧光或组织切片荧光观察后的封片 | |
阿拉伯树胶甘油封片剂 | BioReagent,用于显微镜,适用于微生物学,适用于免疫荧光(IF),适用于免疫组织化学(for IHC) | 封片材料 | 微丝荧光染色封片 | 可作为荧光/显微观察配套封片材料,适合部分免疫染色样本 |
微丝染色应根据实验问题选择方法:固定细胞 F-actin 结构观察以荧光鬼笔环肽或 Actin-Tracker 类探针为主;Actin 亚型或肌成纤维化标志分析以免疫荧光为主;动态重排和细胞迁移过程则适合 LifeAct、Utrophin-ABD、F-tractin 或 SiR-actin 等活细胞策略。
更多相关文章,详见下方:
[1] 微丝染色及形态观察实验
[2] 细胞骨架染色
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