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细胞自噬检测方法的技术路线与结果判读

· · 发布于 2026年6月22日 · 更新于 2026年6月22日 ·

细胞自噬是细胞通过溶酶体系统降解胞质蛋白、受损细胞器、蛋白聚集体及部分外源性成分的重要稳态调控过程。自噬检测的核心不只是观察自噬体数量或单个标志蛋白变化，而是判断自噬通量是否完整，即自噬体形成、成熟、与溶酶体融合以及底物降解是否连续进行。

关键词：细胞自噬；自噬通量；LC3；p62/SQSTM1；Beclin 1；ATG蛋白；自噬体；自噬溶酶体；溶酶体功能；Western blot；荧光成像；透射电子显微镜；线粒体自噬

1、细胞自噬检测的基本原则

1.1 自噬过程的检测节点

（1）自噬起始

自噬起始通常与营养缺乏、能量应激、氧化应激、内质网应激、药物刺激或细胞器损伤有关。ULK1复合体、Beclin 1、VPS34复合体及ATG蛋白参与自噬膜成核和延伸。检测该阶段可观察Beclin 1、ATG5、ATG7、ULK1磷酸化、mTOR/AMPK信号变化等，但这些指标只能提示自噬调控状态，不能单独证明自噬通量增强。

（2）自噬体形成

自噬体形成过程中，LC3-I经脂质化修饰生成膜结合型LC3-II，并定位于自噬体膜。LC3-II增加、LC3点状聚集增多或自噬体数量升高，均可提示自噬体形成增加。但自噬体增多既可能来自自噬诱导增强，也可能来自自噬体降解受阻，因此必须结合通量实验解释。

（3）自噬体成熟与溶酶体融合

成熟自噬体与溶酶体融合形成自噬溶酶体，底物在酸性环境和溶酶体水解酶作用下降解。若溶酶体酸化障碍、膜融合受阻或蛋白酶活性下降，LC3-II和p62可能发生累积。此时表面上表现为自噬相关结构增多，本质上可能是自噬降解阶段阻断。

（4）底物降解

p62/SQSTM1、NBR1等选择性自噬受体可结合泛素化底物并与LC3相互作用，随后随自噬过程进入溶酶体降解。p62下降通常提示自噬底物降解增强，p62累积则提示底物清除不足或自噬阻断。但p62同时受转录调控、氧化应激和炎症信号影响，不能作为唯一判据。

1.2 自噬检测的核心判断逻辑

（1）区分自噬体数量与自噬通量

LC3-II升高、自噬体增多和LC3荧光斑点增加均属于自噬相关表型，但不能直接等同于自噬增强。自噬通量强调动态过程，需比较溶酶体阻断前后LC3-II、p62和自噬报告信号的变化。

（2）联合结构、蛋白和功能指标

可靠的自噬检测通常需要包含至少三个层面的证据：LC3-II或LC3斑点反映自噬体形成，p62/NBR1反映底物降解，Bafilomycin A1、氯喹或双荧光LC3系统反映通量状态。单一指标只适合作为提示性证据。

（3）同步评价细胞状态

细胞死亡、蛋白合成抑制、溶酶体损伤、线粒体去极化、细胞周期改变均可影响自噬检测结果。自噬实验应同步评估细胞活力、凋亡/坏死、溶酶体酸化、总蛋白降解和处理剂量毒性。

表1 细胞自噬检测的核心指标与判读边界

检测层面	常用指标	可说明的问题	判读限制
自噬起始	ULK1、Beclin 1、VPS34、ATG蛋白	自噬调控通路是否被激活或抑制	不能直接说明通量变化
自噬体形成	LC3-II、LC3点状聚集、自噬体数量	自噬体形成或LC3脂质化水平变化	不能区分形成增强与降解受阻
自噬底物降解	p62/SQSTM1、NBR1、泛素化蛋白	底物是否发生累积或清除	受转录、蛋白合成和蛋白酶体影响
自噬通量	溶酶体抑制剂前后LC3-II变化	自噬体形成与降解的动态状态	需优化抑制剂浓度和处理时间
溶酶体功能	LAMP1、LAMP2、LysoTracker、Cathepsin活性	溶酶体酸化、融合和降解能力	不能单独代表自噬起始
超微结构	透射电镜下自噬体、自噬溶酶体	自噬相关膜性结构是否存在	通量判断能力有限

2、LC3相关检测方法

2.1 LC3-I/LC3-II Western blot

（1）检测原理

LC3是细胞自噬检测中最常用的标志蛋白。胞质型LC3-I经脂质化形成LC3-II，后者定位于自噬体膜。Western blot通常检测LC3-I向LC3-II转换情况，并以LC3-II相对内参或LC3-II/LC3-I比值作为自噬体形成的参考指标。

（2）结果判读

LC3-II升高提示自噬体相关膜结构增加，但其原因可能是自噬诱导增强，也可能是自噬体与溶酶体融合或降解受阻。若加入Bafilomycin A1或氯喹后LC3-II进一步累积，说明自噬体仍在持续形成并进入降解流程；若阻断后LC3-II不再明显增加，则需考虑自噬体生成不足或通量已经受阻。

（3）技术要点

LC3-II分子量较小，对电泳胶浓度、转膜效率和抗体特异性较敏感。样本裂解条件需充分提取膜结合型LC3-II，避免因裂解不足低估信号。不同细胞类型基础LC3水平差异较大，不宜直接进行跨细胞系绝对灰度比较。

2.2 LC3免疫荧光与斑点分析

（1）检测原理

基础状态下LC3多呈弥散分布；自噬体形成增加时，LC3可形成点状聚集。通过LC3免疫荧光或GFP-LC3表达系统可观察细胞内LC3 puncta数量、面积和空间分布。

（2）结果判读

LC3斑点增多提示自噬体或LC3阳性膜结构增加，但不能单独证明自噬通量增强。若LC3斑点增多同时p62下降，并且溶酶体抑制剂可进一步增加LC3斑点，较支持自噬通量增强；若LC3斑点增多伴p62累积，则更倾向于自噬降解阶段受阻。

（3）技术要点

GFP-LC3过表达可能形成非特异性蛋白聚集，造成假阳性斑点。应控制转染量和表达水平，并设置空载体、阳性诱导、溶酶体阻断和未处理对照。图像定量应统计每细胞斑点数量、斑点面积、阳性细胞比例或荧光强度分布，而不应仅展示代表性图片。

2.3 LC3检测的主要局限

（1）非通量特异性

LC3-II升高和LC3点状聚集均不能单独区分自噬诱导增强与降解阻断。

（2）非经典LC3相关过程干扰

LC3可参与LC3相关吞噬、内吞体膜修饰及部分非经典膜过程。在免疫细胞、吞噬细胞、感染模型和膜运输异常模型中，LC3阳性结构不一定完全代表经典自噬体。

（3）时间依赖性明显

自噬是动态过程。不同时间点可能出现LC3-II先升高后下降、p62先累积后降解等变化。应设置时间梯度，而非仅检测单一终点。

表2 LC3相关检测方法比较

方法	检测对象	主要优势	主要局限	推荐用途
LC3 Western blot	LC3-I、LC3-II	定量相对明确，适合通量实验	需结合溶酶体阻断解释	自噬体形成与通量分析
LC3免疫荧光	LC3点状聚集	可观察空间分布	不能单独判断通量	自噬体定位和细胞内分布
GFP-LC3报告系统	LC3阳性膜结构	适合成像和动态观察	过表达易造成聚集	自噬体形成观察
LC3免疫组化	组织切片LC3表达	保留组织定位信息	定量和通量判断有限	组织样本自噬相关定位
LC3与LAMP1共定位	自噬体与溶酶体关系	可提示融合阶段变化	共定位不等于完成降解	自噬体成熟分析

3、p62/SQSTM1与自噬底物检测

3.1 p62蛋白水平检测

（1）检测原理

p62/SQSTM1是选择性自噬受体，可结合泛素化底物并通过LC3相互作用区与LC3结合，随后随自噬过程被送入溶酶体降解。因此，p62蛋白水平常用于评价自噬底物清除状态。

（2）结果判读

LC3-II升高并伴随p62下降，通常支持自噬通量增强；LC3-II升高并伴随p62升高，则提示自噬底物累积或溶酶体降解阶段受阻。若p62下降但LC3-II变化不明显，需要排查p62转录抑制、蛋白合成减少或其他降解途径影响。

（3）技术要点

p62受Nrf2、NF-κB、氧化应激、炎症刺激和蛋白稳态压力调控。建议同时检测p62蛋白和SQSTM1 mRNA，以区分转录调控与自噬介导的蛋白降解。

3.2 选择性自噬底物检测

（1）NBR1

NBR1与p62类似，可作为选择性自噬底物的辅助指标。NBR1下降可支持底物降解增强，但仍需结合LC3和通量实验判断。

（2）泛素化蛋白聚集体

自噬受阻时，泛素化蛋白和不溶性蛋白聚集体可能累积。可通过泛素化蛋白Western blot、免疫荧光或不溶性蛋白组分检测评价蛋白质量控制状态。

（3）特异性细胞器底物

选择性自噬应围绕目标细胞器设置指标。线粒体自噬可检测TOM20、COX IV、VDAC、PINK1、Parkin等；内质网自噬可检测ER-phagy受体和内质网标志蛋白；脂滴自噬需结合脂滴染色、LC3共定位和脂代谢指标。

表3 自噬底物检测指标

指标	常用方法	变化意义	判读注意事项
p62/SQSTM1	Western blot、免疫荧光、免疫组化	下降提示底物降解增强；升高提示底物累积或阻断	受转录和应激信号调控
NBR1	Western blot、免疫荧光	辅助判断选择性自噬底物降解	不宜单独作为通量指标
泛素化蛋白	Western blot、免疫荧光	累积提示蛋白降解压力或自噬受阻	蛋白酶体也会影响结果
TOM20/COX IV/VDAC	Western blot、免疫荧光	下降可提示线粒体清除	需结合线粒体质量和细胞活力
不溶性蛋白聚集体	组分提取、免疫荧光	聚集体累积提示蛋白稳态异常	需区分自噬和蛋白酶体作用

4、自噬通量检测方法

4.1 溶酶体抑制剂法

（1）检测原理

自噬通量检测的核心是比较溶酶体抑制剂处理前后LC3-II或自噬底物的变化。常用试剂包括Bafilomycin A1、氯喹、羟氯喹、NH4Cl和溶酶体蛋白酶抑制剂。若溶酶体降解被阻断后LC3-II进一步累积，说明自噬体持续形成并进入降解流程。

（2）结果判读

处理组LC3-II升高，加入溶酶体抑制剂后LC3-II进一步升高，支持自噬通量增强；若LC3-II已升高但抑制剂不能进一步增加，提示自噬降解阶段可能受阻。p62在溶酶体抑制剂存在时通常发生累积，若未累积需排查处理时间、蛋白合成和检测灵敏度。

（3）技术要点

抑制剂浓度和处理时间需通过预实验确定。Bafilomycin A1可抑制溶酶体酸化并影响自噬体-溶酶体融合相关过程；氯喹可升高溶酶体pH，但也可能影响内吞、膜运输和细胞毒性。通量实验应避免过长时间处理导致继发性细胞损伤。

4.2 mRFP-GFP-LC3双荧光系统

（1）检测原理

mRFP-GFP-LC3利用GFP对酸性环境敏感、RFP相对耐酸的特点区分自噬体和自噬溶酶体。中性自噬体中GFP和RFP信号同时存在，呈黄色斑点；进入酸性自噬溶酶体后GFP信号淬灭，主要显示红色斑点。

（2）结果判读

黄色斑点增加提示自噬体增多；红色斑点增加提示自噬体进入酸性溶酶体并形成自噬溶酶体。若黄色斑点明显增加而红色斑点不增加，需考虑自噬体-溶酶体融合障碍或溶酶体酸化异常。

（3）技术要点

该系统需控制报告蛋白表达水平，避免过表达导致非特异性聚集。成像参数应保持一致，并设置饥饿诱导、溶酶体阻断和未处理对照。定量时应分别统计黄色斑点、红色斑点及红/黄斑点比例。

4.3 GFP-LC3-RFP-LC3ΔG系统

（1）检测原理

该系统利用GFP-LC3可被自噬降解，而RFP-LC3ΔG不参与自噬降解的特点，通过GFP/RFP比值反映自噬通量。自噬增强时GFP-LC3降解增加，GFP/RFP比值下降。

（2）应用特点

该方法较适合定量自噬通量变化，可减少单纯斑点计数的主观性。适用于药物筛选、遗传干预和动态通量分析。

（3）注意事项

需保证报告系统稳定表达，并排除处理因素对GFP/RFP蛋白表达、翻译效率、荧光稳定性和细胞存活率的影响。

表4 自噬通量检测方法比较

方法	检测逻辑	主要优势	主要局限	适用场景
LC3-II加溶酶体抑制剂	比较阻断前后LC3-II累积	通量判断直接，适合Western blot	抑制剂可能产生细胞毒性和非特异影响	常规自噬通量检测
p62加溶酶体抑制剂	比较底物降解是否受阻	可观察底物清除状态	p62受转录调控影响	底物降解辅助判断
mRFP-GFP-LC3	区分自噬体与自噬溶酶体	可视化通量过程	依赖转染和成像质量	活细胞或固定细胞成像
GFP-LC3-RFP-LC3ΔG	通过荧光比值反映通量	适合定量和筛选	需稳定报告系统	药物筛选、机制研究
LC3与LAMP1共定位	判断自噬体与溶酶体关系	空间信息较明确	共定位不等于降解完成	融合阶段分析

5、溶酶体功能与荧光染料检测

5.1 LysoTracker与LysoSensor

（1）检测原理

LysoTracker和LysoSensor可标记酸性细胞器，用于观察溶酶体酸化状态和酸性区室变化。自噬最终依赖溶酶体降解，因此溶酶体酸化异常会直接影响自噬通量。

（2）结果判读

酸性溶酶体信号增强可能提示溶酶体数量或酸化增强，也可能来自溶酶体累积、损伤或自噬阻断。若LC3-II升高伴随LysoTracker信号异常增强和p62累积，应考虑自噬降解阶段受阻。

（3）注意事项

LysoTracker不是自噬特异性染料，只能作为溶酶体状态指标。染料浓度、孵育时间、细胞密度和成像参数都会影响信号强度。

5.2 MDC与Cyto-ID

（1）MDC染色

MDC可用于标记自噬泡样结构，但特异性有限，易受其他膜性结构影响。单独使用MDC不能作为自噬发生或通量增强的充分证据。

（2）Cyto-ID染色

Cyto-ID可用于检测自噬相关囊泡，常用于流式或荧光显微分析。其优势是操作相对简便，适合筛查实验，但仍需结合LC3、p62或通量实验验证。

（3）判读原则

荧光染料类方法适合作为快速筛查和辅助观察，不应替代LC3-II、p62和自噬通量检测。若染料信号增强但经典自噬指标不支持，应谨慎解释。

5.3 溶酶体蛋白与酶活检测

（1）Cathepsin活性

Cathepsin B、Cathepsin D、Cathepsin L等溶酶体蛋白酶活性可反映降解能力。若自噬体形成正常但Cathepsin活性下降，自噬底物仍可能无法有效降解。

（2）LAMP1/LAMP2

LAMP1和LAMP2是溶酶体相关膜蛋白，可用于观察溶酶体数量、分布及其与LC3结构的共定位。LAMP2异常可影响自噬体-溶酶体融合和底物降解。

（3）溶酶体pH

溶酶体酸化是自噬降解的关键条件。药物、遗传干预或细胞损伤导致pH升高时，可造成p62累积、LC3-II升高和底物清除障碍。

表5 溶酶体与自噬相关荧光检测方法

方法	检测对象	与自噬的关系	局限性
LysoTracker	酸性溶酶体区室	反映溶酶体数量和酸化状态	非自噬特异
LysoSensor	溶酶体pH变化	判断溶酶体酸化是否异常	受染料条件和成像参数影响
MDC	自噬泡样结构	可辅助观察自噬相关囊泡	特异性较低
Cyto-ID	自噬相关囊泡	适合筛查和流式检测	需经典指标验证
Cathepsin活性检测	溶酶体蛋白酶功能	判断底物降解能力	不能反映自噬起始
LAMP1/LAMP2免疫荧光	溶酶体膜结构	可分析自噬体-溶酶体关系	共定位不等于降解完成

6、电子显微镜检测

6.1 检测价值

（1）超微结构观察

透射电子显微镜可直接观察双层膜自噬体、单层膜自噬溶酶体、吞噬胞质内容物的膜性结构以及不同降解阶段的囊泡形态，是确认自噬相关结构的重要方法。

（2）结构分辨优势

电子显微镜可观察细胞器损伤、线粒体包裹、膜性结构形成和溶酶体内降解内容物，对线粒体自噬、细胞器选择性自噬和组织样本超微结构分析具有较高价值。

6.2 判读要点

（1）自噬体

典型自噬体为双层膜结构，内部可见未降解的胞质成分或细胞器。若仅观察到单层空泡或普通溶酶体，不能直接定义为自噬体。

（2）自噬溶酶体

自噬溶酶体多为单层膜结构，内部含降解中的胞质成分，电子密度不均。其出现提示自噬体进入降解阶段，但仍不能单独提供通量定量信息。

（3）定量方式

可统计每个细胞自噬体/自噬溶酶体数量、单位面积自噬结构数量或含线粒体结构的自噬囊泡比例。样本固定、取材区域、切片质量和观察视野选择会显著影响结果。

6.3 局限性

电子显微镜对样本制备要求高，通量信息有限，且观察视野数量有限。电镜应作为结构验证方法，而不是唯一自噬检测依据。若电镜观察到自噬体增多，仍需结合LC3-II、p62和溶酶体阻断实验判断自噬通量。

表6 电子显微镜下自噬结构判读

结构类型	形态特征	生物学意义	判读注意事项
自噬体	双层膜，包裹胞质或细胞器	自噬体形成	需与普通空泡区分
自噬溶酶体	单层膜，内部含降解物	自噬体进入降解阶段	不能单独定量通量
包裹线粒体结构	线粒体被膜性结构包绕	可能提示线粒体自噬	需结合线粒体标志物
空泡样结构	形态不规则，内容物少	可能为损伤或非特异空泡	不能直接定义为自噬
溶酶体增多	电子密度较高或内容物复杂	降解系统活跃或受阻	需结合溶酶体功能检测

7、分子水平与信号通路检测

7.1 自噬相关蛋白

（1）ATG蛋白

ATG5、ATG7、ATG12、ATG16L1等参与自噬体形成。其表达变化或基因敲低可用于验证自噬依赖性。若某种处理引起LC3-II升高，而ATG5或ATG7敲低后该变化消失，说明该过程更可能依赖经典自噬途径。

（2）Beclin 1

Beclin 1参与自噬起始和膜成核。Beclin 1变化可提示自噬起始调控状态，但不能单独代表自噬通量变化。

（3）ULK1与mTOR/AMPK信号

mTOR抑制、AMPK激活和ULK1磷酸化变化可提示营养和能量感应通路对自噬的调控。饥饿、Rapamycin、Torin1和能量应激常通过这些通路影响自噬。信号通路指标应与LC3、p62和通量实验配合解释。

7.2 mRNA检测

（1）适用范围

qPCR可检测MAP1LC3、BECN1、ATG5、ATG7、SQSTM1等基因表达变化，用于分析自噬相关转录调控背景。

（2）局限性

自噬主要是动态降解过程，mRNA表达不能直接反映自噬通量。尤其是SQSTM1 mRNA上调时，即使自噬降解增强，p62蛋白也可能不明显下降。

7.3 遗传学验证

（1）基因敲低或敲除

通过siRNA、shRNA或CRISPR等方式敲低ATG5、ATG7、BECN1、ULK1，可验证某一表型是否依赖自噬。

（2）功能救援

在敲低背景下回补相关基因，若自噬表型和细胞功能改变被恢复，可增强机制结论的可信度。

（3）选择性自噬验证

对于线粒体自噬、内质网自噬、脂滴自噬等，需要结合特异性受体、细胞器标志物和共定位分析，不能只依赖总LC3变化。

表7 分子水平检测指标

检测类别	常用指标	可说明的问题	主要局限
自噬起始	ULK1、Beclin 1、VPS34	自噬起始信号是否被调控	不能直接说明通量
自噬体形成	ATG5、ATG7、ATG12、ATG16L1	自噬机器是否参与	表达量变化不等于功能变化
mTOR/AMPK信号	p-mTOR、p-AMPK、p-ULK1	营养和能量信号调控	通路复杂，需结合功能实验
转录检测	MAP1LC3、SQSTM1、BECN1 mRNA	转录调控背景	不能替代蛋白通量检测
遗传验证	ATG5/ATG7敲低或敲除	自噬依赖性	可能引起长期适应性改变

8、细胞自噬检测相关产品选型

表8 自噬诱导与抑制干预试剂

货号	产品名称	级别/规格	适用检测环节	应用定位
E743125	Earle's Balanced Salt Solution (with Ca2+ & Mg2+，自噬诱导试剂)		饥饿/营养缺乏诱导	用于构建营养应激或自噬诱导条件，可作为自噬诱导实验基础处理体系
S129300	STF-62247，自噬诱导剂	≥98%	自噬诱导	用于药理性诱导自噬，适合与LC3-II、p62和通量实验联用
Lib412034	自噬化合物库		自噬调控筛选	用于自噬诱导剂、抑制剂或调控化合物筛选
R408790	雷帕霉素	Moligand™，10 mM in DMSO	自噬诱导对照	用于mTOR依赖性自噬诱导，常作为阳性对照
S115842	雷帕霉素	Moligand™，≥98%(HPLC)	自噬诱导对照	用于Western blot、荧光成像和通量实验中的阳性诱导
S293790	雷帕霉素	Moligand™，≥95%(HPLC)	自噬诱导	用于mTOR抑制相关自噬研究
T420960	Torin 1	Moligand™，2 mM in DMSO	自噬诱导	用于mTORC1/2抑制相关自噬激活研究
T129642	Torin 1，mTOR抑制剂	Moligand™，≥97%	自噬诱导对照	适合mTOR依赖性自噬通路验证
D110019	D-海藻糖，无水	≥99%	mTOR非依赖性自噬诱导	用于mTOR非依赖性自噬诱导研究
D427220	D-海藻糖，无水	10 mM in DMSO	自噬诱导	用于自噬诱导条件比较
M486160	3-甲基腺嘌呤	自噬抑制剂	自噬起始/成核阻断	用于PI3K相关自噬起始抑制和自噬依赖性验证
M424419	3-甲基腺嘌呤	10 mM in DMSO	自噬起始/成核阻断	用于药理性阻断自噬体形成
M129496	3-甲基腺嘌呤	≥98%	自噬起始/成核阻断	用于自噬早期抑制对照
W409260	渥曼青霉素	Moligand™，10 mM in DMSO	自噬起始抑制	用于VPS34/PI3K相关自噬起始阶段干预
W100984	渥曼青霉素	Moligand™，≥98%	自噬起始抑制	用于自噬形成阶段阻断验证
A1423681	ATG7-IN-1	≥99%	自噬体形成干预	用于ATG7依赖性自噬过程抑制
A1497260	ATG7-IN-2	Moligand™，10 mM in DMSO	自噬体形成干预	用于ATG7相关药理抑制实验
A1424123	ATG7-IN-2	≥99%	自噬体形成干预	用于ATG7依赖性机制验证
A1423893	ATG7-IN-3	≥99%	自噬体形成干预	用于ATG7相关自噬抑制研究
B1423685	Beclin1-ATG14L interaction inhibitor 1	≥99%	自噬起始/膜成核干预	用于Beclin1-ATG14L相互作用相关自噬机制研究
B1423730	Beclin1-Bcl-2 interaction inhibitor 1		自噬起始调控	用于Beclin1-Bcl-2轴相关自噬调控研究
T648510	Tat-beclin 1	≥99%	自噬诱导	用于Beclin 1相关自噬诱导研究
T414076	Tat-beclin 1 (Tat-BECN1) 醋酸盐	≥98%	自噬诱导	用于诱导自噬并验证Beclin 1相关通路
T1422310	Tat-beclin 1 scrambled	≥99%	自噬诱导对照	用于Tat-beclin 1相关实验的序列对照
T1422555	Tat-beclin 1 scrambled TFA	≥98%	自噬诱导对照	用于排除Tat-beclin 1非特异效应

表9 自噬染色、溶酶体功能与荧光成像试剂

货号	产品名称	级别/规格	适用检测环节	应用定位
C1520245	细胞自噬/细胞毒性双色检测试剂盒（MDC/PI法）	BioReagent，生物染色剂，用于显微镜，无菌，适用于荧光分析	自噬泡样结构/细胞毒性	用于MDC标记自噬相关囊泡并结合PI评价细胞毒性
C1511655	细胞自噬染色检测试剂盒（MDC法）	BioReagent，生物染色剂，用于显微镜	自噬泡样结构	用于自噬相关囊泡快速荧光观察，需结合LC3/p62验证
C1520234	细胞自噬绿色检测试剂盒（MDC法）	BioReagent，生物染色剂，用于显微镜，无菌，适用于荧光分析	自噬泡样结构	用于绿色荧光检测自噬相关囊泡，适合显微镜观察和筛查实验
L1455325	LysoTracker Blue DND-22		溶酶体酸化/定位	用于酸性溶酶体区室标记，可辅助判断自噬降解阶段
L647096	LysoTracker Red	≥97%	溶酶体酸化/定位	用于溶酶体定位及LC3、p62共定位分析
L1455226	LysoTracker Yellow HCK 123	≥98%	溶酶体酸化/定位	用于酸性溶酶体区室观察
L1455145	LysoSensor PDMPO	≥98%	溶酶体酸化功能	用于评价溶酶体pH变化和自噬降解条件
O1501802	Hoechst 33342染色液	适用于免疫荧光(IF)，BioReagent，即用型，生物染色剂，适用于荧光分析，生物染料级，用于显微镜，用于细胞培养，1.0 mg/ml in H₂O	荧光成像辅助定位	用于LC3、p62、LAMP1等免疫荧光中的核定位和细胞计数
B422759	赫斯特荧光染料33342	10 mM in DMSO	荧光成像辅助定位	用于活细胞或固定细胞核染
B113845	赫斯特荧光染料33342	≥98%	荧光成像辅助定位	用于自噬荧光检测中的细胞核定位
B755401	赫斯特荧光染料33342，三盐酸盐	Cell-permeable, adenine-thymine-specific fluorescent stain	荧光成像辅助定位	用于细胞核染色和图像归一化
D489987	4',6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐	≥97%	荧光成像辅助定位	用于免疫荧光中细胞核定位
D106471	4',6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐	≥98%	荧光成像辅助定位	用于LC3/p62/LAMP1共定位成像中的核复染
D423005	4,’6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐	10 mM in DMSO	荧光成像辅助定位	用于自噬相关免疫荧光实验的核染
D598342	DAPI染色液（即用型）		荧光成像辅助定位	用于自噬荧光成像中的核定位和细胞计数

表10 LC3与p62相关检测工具

货号	产品名称	级别/规格	适用检测环节	应用定位
A743522	AAV-mCherry-GFP-LC3B(AAV9)	10^13 vp/ml	自噬通量	用于区分自噬体与自噬溶酶体，适合细胞或动物模型通量观察
A743648	Ad-GFP-LC3B		自噬体形成	用于观察GFP-LC3B点状聚集和自噬体形成
A743656	Ad-mCherry-GFP-LC3B		自噬通量	用于黄色/红色斑点区分自噬体和自噬溶酶体
A743666	AdPlus-mCherry-GFP-LC3B		自噬通量	用于自噬体成熟和溶酶体融合过程成像
L747631	Lenti-EGFP-LC3B	10^9 TU/ml	自噬体形成	用于建立稳定LC3B报告细胞系
L747634	Lenti-mCherry-EGFP-LC3B	10^9 TU/ml	自噬通量	用于稳定表达系统中的自噬通量观察
P748882	pCMV-GFP-LC3B		自噬体形成	用于瞬时表达GFP-LC3B并观察LC3点状聚集
P748885	pCMV-mCherry-GFP-LC3B		自噬通量	用于自噬体与自噬溶酶体区分
Ab156564	LC3B Mouse mAb	无载体，ExactAb™，无叠氮钠，已验证，高性能，PBS Only，≥95%(SDS-PAGE)，1.0 mg/mL	LC3 Western blot/免疫荧光/免疫组化	用于检测LC3-II变化或LC3点状聚集，是自噬检测核心抗体
Ab112866	Recombinant LC3B Antibody	重组，ExactAb™，已验证，见COA	LC3检测	用于LC3B蛋白表达、定位和自噬体形成分析
Ab326883	Recombinant MAP1LC3B Antibody	敲低验证	LC3检测	适合结合MAP1LC3B敲低体系验证抗体特异性
M1465490	MAP1LC3B Human Pre-designed siRNA Set A		自噬依赖性验证	用于敲低LC3B，验证LC3相关表型
M1476126	MAP1LC3B2 Human Pre-designed siRNA Set A		自噬依赖性验证	用于LC3B2相关自噬机制研究
EJ1514111	人微管相关蛋白轻链3B(LC3B)酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	LC3B定量	用于人源样本LC3B水平检测
EJ1512066	大鼠微管关联蛋白1轻链3β(MAP1LC3b)酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	LC3B定量	用于大鼠样本LC3B水平检测
A743649	Ad-GFP-p62		自噬底物定位	用于观察p62聚集、底物识别和选择性自噬相关定位
A743657	Ad-mCherry-p62		自噬底物定位	用于p62阳性聚集体和自噬底物定位观察
P748883	pCMV-GFP-p62		自噬底物定位	用于GFP-p62表达和p62聚集体成像
P748886	pCMV-mCherry-p62		自噬底物定位	用于p62选择性自噬底物定位观察
S1490309	SQSTM1 Human Pre-designed siRNA Set A		p62依赖性验证	用于敲低p62并验证选择性自噬相关机制
Ab129090	SQSTM1 Mouse mAb	无载体，ExactAb™，已验证，高性能，见COA	自噬底物降解检测	用于Western blot、免疫荧光或免疫组化检测p62水平
EJ1514216	人死骨片1(SQSTM1)酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	p62定量	用于人源样本p62/SQSTM1水平检测
EJ1512094	大鼠死骨片1(SQSTM1)酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	p62定量	用于大鼠样本p62/SQSTM1水平检测

表11 Beclin 1、ATG与ULK1相关检测工具

货号	产品名称	级别/规格	适用检测环节	应用定位
Ab215027	Beclin 1 Mouse mAb	无载体，ExactAb™，无叠氮钠，已验证，高性能，PBS Only，≥95%(SDS-PAGE)，1.0 mg/mL	自噬起始检测	用于检测自噬起始和膜成核相关蛋白Beclin 1
Ab326388	Recombinant Beclin 1 Antibody	敲低验证	自噬起始检测	适合结合敲低体系验证Beclin 1信号
Ab325630	Recombinant Beclin 1 Antibody	敲低验证	自噬起始检测	用于Beclin 1表达及自噬起始分析
Ab090924	Recombinant Beclin 1 Antibody	重组，ExactAb™，已验证，见COA	自噬起始检测	用于Western blot或免疫染色检测Beclin 1
EJ1514449	人磷酸化自噬启动蛋白1(P-ULK1)酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	自噬起始信号检测	用于ULK1磷酸化水平定量，反映自噬起始调控状态
EJ1514781	人自噬相关蛋白3(ATG3)酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	自噬体形成相关检测	用于ATG3水平检测，辅助评价LC3脂质化相关过程
Ab326060	ATG5 Antibody	敲低验证	自噬体形成检测	用于检测ATG5及经典自噬体形成机制
Ab089177	Recombinant APG5L/ATG5 Antibody	ExactAb™，Validated，重组，0.3 mg/mL	自噬体形成检测	用于ATG5表达检测和自噬依赖性验证
Ab326888	Recombinant ATG5 Antibody	敲低验证	自噬体形成检测	适合敲低验证背景下的ATG5检测
A1476932	ATG5 Human Pre-designed siRNA Set A		自噬依赖性验证	用于敲低ATG5并验证经典自噬途径依赖性
P743975	ATG5基因敲除HEK293T细胞RIPA裂解液		抗体验证/机制对照	用于ATG5抗体验证和阴性对照
P743976	ATG5基因敲除HEK293T细胞Trizol裂解液		RNA检测对照	用于ATG5敲除背景下转录检测对照
EJ1514782	人自噬相关蛋白5(ATG5)酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	自噬体形成相关检测	用于人源样本ATG5水平检测
Ab090020	ATG7 Antibody	ExactAb™，Validated，0.6 mg/mL	自噬体形成检测	用于ATG7表达检测和LC3脂质化相关机制分析
Ab327383	Recombinant ATG7 Antibody	敲低验证	自噬体形成检测	适合ATG7敲低体系下的抗体验证
Ab327410	Recombinant ATG7 Antibody	敲低验证	自噬体形成检测	用于ATG7相关自噬机制研究
A1491055	ATG7 Human Pre-designed siRNA Set A		自噬依赖性验证	用于敲低ATG7并验证经典自噬依赖性

表12 溶酶体标志物、蛋白酶与线粒体自噬相关工具

货号	产品名称	级别/规格	适用检测环节	应用定位
Ab326444	LAMP1/CD107a Antibody	敲低验证	溶酶体定位/自噬融合	用于检测溶酶体膜标志物LAMP1
Ab187900	LAMP1 Mouse mAb	无载体，ExactAb™，无叠氮钠，已验证，≥95%(SDS-PAGE)，1.0 mg/mL	溶酶体定位	用于LC3-LAMP1共定位及溶酶体数量分析
Ab112729	LAMP1/CD107a Mouse mAb	见COA	溶酶体定位	用于自噬体-溶酶体融合相关分析
L1482144	LAMP1 Human Pre-designed siRNA Set A		溶酶体功能验证	用于敲低LAMP1并分析溶酶体/自噬融合阶段
P747584	LAMP1基因敲除HEK293T细胞RIPA裂解液		抗体验证/机制对照	用于LAMP1抗体验证和阴性对照
P747585	LAMP1基因敲除HEK293T细胞Trizol裂解液		RNA检测对照	用于LAMP1敲除背景下转录检测
Ab112746	Recombinant LAMP2 Antibody	ExactAb™，Validated，重组，0.8 mg/mL	溶酶体功能检测	用于LAMP2表达、定位和溶酶体相关自噬降解分析
Ab325845	Recombinant LAMP2 Antibody	敲低验证	溶酶体功能检测	适合LAMP2敲低验证背景下检测
L1484318	LAMP2 Human Pre-designed siRNA Set A		溶酶体功能验证	用于验证LAMP2依赖的自噬体-溶酶体功能
EJ1514271	人溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	溶酶体标志物定量	用于人源样本LAMP2水平检测
Ab326095	Cathepsin D LC Antibody	敲低验证	溶酶体降解功能	用于检测溶酶体蛋白酶相关降解能力
Ab215111	Cathepsin D Mouse mAb	无载体，ExactAb™，无叠氮钠，已验证，高性能，PBS Only，≥95%(SDS-PAGE)，1.0 mg/mL	溶酶体蛋白酶检测	用于Cathepsin D表达与成熟分析
C659428	Cathepsin D and E FRET Substrate acetate	≥98%	溶酶体蛋白酶活性	用于Cathepsin D/E酶活检测，辅助评价溶酶体降解功能
C1441538	Cathepsin D/E Substrate, Fluorogenic		溶酶体蛋白酶活性	用于荧光法检测Cathepsin D/E活性
P1491057	PINK1 Human Pre-designed siRNA Set A		线粒体自噬验证	用于敲低PINK1并验证PINK1依赖性线粒体自噬
EJ1513577	人PTEN诱导假定激酶1(PINK1)酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	线粒体自噬标志物定量	用于人源样本PINK1水平检测
EJ1511892	大鼠PTEN诱导假定激酶1(PINK1)酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	线粒体自噬标志物定量	用于大鼠样本PINK1水平检测
EJ1512535	小鼠PTEN诱导假定激酶1(PINK1)酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	线粒体自噬标志物定量	用于小鼠样本PINK1水平检测
Ab120363	Recombinant Parkin Antibody	重组，ExactAb™，已验证，见COA	线粒体自噬检测	用于PINK1/Parkin通路相关线粒体自噬研究
EJ1513570	人Parkin蛋白(PP)酶联免疫吸附测定试剂盒	BioReagent	线粒体自噬标志物定量	用于人源样本Parkin蛋白水平检测
C1509561	CCCP溶液（10 mmol/L）	BioReagent，10 mmol/L	线粒体自噬诱导	用于诱导线粒体膜电位下降，构建PINK1/Parkin依赖性线粒体自噬模型
C424728	羰基氰酯-3-氯苯基腙	10 mM in DMSO	线粒体自噬诱导	用于线粒体去极化和线粒体自噬诱导
C303974	羰基氰酯-3-氯苯基腙（CCCP）	Moligand™，≥98%	线粒体自噬诱导	用于PINK1/Parkin通路和线粒体清除实验
M1455700	MitoTracker Deep Red FM	≥99%	线粒体定位/线粒体自噬	用于线粒体质量、分布及与LC3/LAMP1共定位分析
M1455293	MitoTracker Orange CMTMRos		线粒体定位/膜电位相关观察	用于线粒体结构和线粒体自噬相关共定位分析
N121291	尼罗红	BioReagent，适用于荧光分析，≥95%(HPLC)	脂滴自噬辅助检测	用于脂滴染色，可与LC3/LAMP1共定位分析脂滴自噬
O421236	油红O	10 mM in DMSO	脂滴自噬辅助检测	用于脂质积累观察，需结合自噬通量指标解释脂滴自噬
O104972	油红O	生物染色剂	脂滴自噬辅助检测	用于脂滴和中性脂质染色，适合脂滴自噬背景观察

细胞自噬检测应以自噬通量为中心建立实验设计。LC3-II、p62、自噬报告系统、溶酶体功能检测和电子显微镜各自反映不同环节，联合应用才能区分自噬诱导增强、自噬体堆积和溶酶体降解障碍。

细胞自噬检测方法的技术路线与结果判读

细胞自噬检测方法的技术路线与结果判读

1、细胞自噬检测的基本原则

2、LC3相关检测方法

3、p62/SQSTM1与自噬底物检测

4、自噬通量检测方法

5、溶酶体功能与荧光染料检测

6、电子显微镜检测

7、分子水平与信号通路检测

8、细胞自噬检测相关产品选型

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